洁净区环境消毒效果验证方案 讨论

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再验证方案 WK :~  2 X9 N9 F( T6 h0 Q" v" J6 t2 ^
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$ C. e  c8 D" Q6 A8 T! [+ U: SrkM'W %Y'  2 J0 Y4 _0 m  g! d9 s% a) w5 m) b
验证项目    方案编号 r!,YvnC56  2 E6 |. G* R' N. h/ d# }
洁净区环境消毒效果验证方案    LR{@rHG  0 c3 r: }2 A) O; d
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制订：                        日期：      年  月  日 H=+s!?2  9 I1 K9 Z! w  |4 A( _- N6 ]
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审核：                        日期：      年  月  日 69W3lG  
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批准：                        日期：      年  月  日 _<<c_+b&  
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目录 |F^6OY1  
; U- g7 @( A& t, |, e8 u1.概述 F&Y"`Jxi  
) n5 t" ?+ g' j+ c2.验证目的 `(grOh
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. M$ b! o1 Z( ^! q  |7 J3.验证主要人员及职责分工 ??;m5<x  & r6 d" a* y8 ]4 w
4验证范围 )/^[AF|}3  3 i1 ^( V' R' i9 ?6 h8 A
5.验证准备工作 b.LP-,>~  
% [( {# M/ S9 I: [  c( |6.验证方法及内容 Du)@@  4 K7 `. P/ h6 E# l+ L; T( o: O
7.验证可接受标准 ~A{6VV5lS  $ y. _5 g( h. g- O" ~3 s
8.验证进度按排 .Pd~):5  
3 o/ w( F! j9 l3 o9.验证结果评定 )f%<fu'  
. O) ]% ]$ S2 ]1 U; A; D10.附表 uM]b4 )  
1 F  D: C; {5 W' I. V* ]_1、概述：  ]R8Xa0t  4 Y+ x0 g" M+ p8 q
臭氧是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。我们公司现采用CF—K系列臭氧发生器对各生产车间洁净室（区）进行消毒。 G9GpQV-T`6  8 D  u6 X) b. U% f: A8 u" X
m)sYX=Qw  ; y! R1 n% Q) L0 {! ~4 L0 h
2. 验证目的：通过对在一定的时间洁净室（区）内臭氧浓度的测试，验证在规定的时间内洁净区各洁净间臭氧浓度是否达到标准规定；通过微生物挑战性试验，确定在一定时间内臭氧对洁净室（区）的灭菌效果。 Jh1!|D7+  
8 _. b; c3 B$ @( bEKD#TOV  5 P( [+ _) I, e
3.验证主要人员及职责分工 MO ,?5  
5 P2 l, D' h3 S部门    姓名    职责 k]h;  
( }+ E) p& a( \. m  R总经理        负责验证方案及报告的批准 {DQ (bX    @3 _7 d# O& H9 x4 T4 q9 F
生产副总        负责审核验证方案及报告 lNb%,:<EF}  
8 D( Q5 _6 |+ a+ a( P- m" F. a质量副总        负责审核验证方案及报告 -Q!~f1%  : Z& S, ?1 }# X6 j5 S, d; k. x
生产技术部        验证小组组长，负责组织实施验证方案 = ?;:X $K  
' z3 V  [  j# e& R  ~' D, R生产技术部        负责起草验证方案及制剂验证中数数据的收集、整理。 b&P 9w$2h  
% v7 A+ k' ~' B: ^0 W5 E综合制剂        负责制剂验证的组织及实施 \\z8hskmt  ( D. T0 d$ c2 w5 _+ Q# _/ \" \
提取        负责提取、前处理验证的实施及过程中说数据的收集、整理。 V-0VPn){  
6 B8 h7 G# y* \, I质保部        负责组织验证全过程的监控及取样 5Wl[?6  
6 O6 f" n4 V% C, K质保部        负责验证过程的监控及取样 ov;k#
  # @/ B  j! o) A5 B( O7 ~
化验室        负责样品的检测 -sj?s1/*  
  [8 e+ c) n4 |工程部        负责臭氧发生器的正常运行和洁净区臭氧浓度检测 zM2zZ -  $ g9 r1 W6 N" z
?i2uY9%  
! ?3 ^' E" E3 r9 `/ g: i; w  A7 ~4.验证范围：综合制剂液体线、固体线、提取车间前处理洁净区、提取洁净区。 Q|#MaU  ! k$ U9 F* Y  ]. w9 m& e6 ?
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& p9 f! x- H( e9 w- e8 e7 I( G/ N+ O5.验证准备工作： r>5Ai0(TG  
) p% ]& R9 z$ W# l* M" E  生物指示剂；金黄色葡萄球菌（6538株）（菌液浓度1×107个/ml）、配制营养琼脂培养基、灭菌平皿、纯化水、20%碘化钾溶液、1.000mol/L Buh8_$) P  * D5 l, ~: v6 ?( x& G& U9 t
硫酸溶液\硫代硫酸钠滴定液化(0.0010mol/L)\淀粉指示剂、锥形瓶、采样器、滴定管。 I@,*|Cco  % M( {7 c0 v, Y1 {/ P! n2 v
6. 验证方法及内容 q#Q kWT1T  7 ~; `" i: `8 p6 z
6.1臭氧浓度的验证： j l6M1[Z#  ) R) x8 m. W8 u( N* b0 K! Q
6.1.1.开启净化空调机组和臭氧发生器60分钟或90分钟后（不在同一天进行），分别在洁净室远离送风口选择三处测定臭氧浓度， 'Uz)=&:we  8 `/ r" \( w$ T, A, B
记录于附表一。 E&eYK<;  8 N/ k3 ~+ I1 D! W" ^9 M3 Z1 J1 [
6.1.2测试方法： 5628/ m   
9 d+ u3 X' e6 k6.1.2（一）化学滴定法 khsscE-  
) }. J, K; y/ R& r（1）向锥形瓶中加纯化水100ml，再加入20%KI溶液20ml，然后再加入纯化水250ml，盖塞后混匀。 7,#3 -BnAd  - o* V; ~: Z! y' \4 I; r
（2）开启采样器，置换排气，再准确采取2L臭氧化气，充分混匀。取下瓶塞，加入1.000mol/L的H2SO4溶液5ml，混匀后放置。放置10min后加0.5 %，淀粉指示剂1ml，混匀。待反应至浅黄色时，用硫代硫酸钠滴定液（0.0010mol/L）滴定至无色。计算：  Er4}+'$dB  
) N6 H& m8 L# ^  o  v. }4 d                      M×V×48.00 oGaI8Cz  
  [- h3 O0 D& _. E3 `2 g1 l1 Q臭氧浓度（mg/L）=                     
M3R~i  
( M8 F8 u, ^; m3 u$ `                      2 ×2× 1000                                              3Omq,MqC  / c2 y9 N# E* e! N
$GrEeH/  6 B& @; X/ k" W3 v
. X~Uz  9 Q3 @2 K, `: I6 B: Q8 Q9 s+ c5 }5 B
式中:M为 Na2S2O3克分子浓度：V为Na2S2O3消耗的毫升数。 @$SJud2H  
5 B, E! l9 o% v" X4 R6.1.2（二）仪器检测法 P'm+}p  
" I; V% a# l% g（1）提前将臭氧浓度检测仪放入规定区域，接通电源预热。 8EuQu8oek  
% M& r, q" R/ X9 _5 V% r+ s（2）达到臭氧开启的规定时间后，测试人按照规定进入相应的房间，开启臭氧浓度检测仪，将检测仪探头打开，稳定的暴露在被选定的环境空间中，准确记录仪器所显示的数据。 %IVq _ h@M  
/ t0 g0 P. B' L（3）测试结束后，关闭仪器电源，测试人立即按照规定离开洁净区。 CP`8
r#3  & F9 z8 z$ P0 [: H6 i; s
6.2灭菌效果验证 \#s5O$kB  
2 H& g* \, C) r2 O6.2.1微生物挑战性试验: -#u1n:W=  
2 ^9 R5 z0 X- n8 U7 `1 t6.2.1.1吸取菌液0.5ml于平皿内,分别摆放在洁净室远离送风口处的地（台）面上（选择三处），打开平皿盖，同时关闭空调的新风阀，开启臭氧发生器60分钟或90分钟（不在同一天进行）。在灭菌停机后30分钟取出平皿，倒入15ml培养基，于30~35℃培养48小时，观察结果并记录于附表二。
Pq)V)sb^  
; W( r; L, y2 w0 c5 n0 b3 Q! }) d7 J微生物挑战性试验的同时做空皿对照（不经过臭氧灭菌，其余同上）。 9!,sEbGJ  - d0 ^/ \1 C5 e* i4 n3 b& W( D
6.2.2涂抹验证 d84^08{  8 _* p% ?4 Z8 F, D+ s% _
6.2.2.1涂抹取样方法 jt N{fk  " E% D& E, u: y  O$ \+ x
用含有乙醇（水、生理盐水）的脱脂棉签擦拭25平方厘米区域面积，做微生物检查应先对镊子、棉签进行消毒处理，用镊子取棉签在生理盐水中湿润，用4个棉签共擦拭取样100平方厘米 ^ho@,z_  
* S9 R0 P4 R4 d3 r' }. w微生物检测：将取样后4个棉签放于无菌生理盐水20ml中，用超声波洗涤2分钟，取洗涤水进行微生物检查。用琼脂培养基，倒入培养皿中。取棉签洗涤水0.1 ml均匀涂布在每个培养皿的培养基上，各接种10个培养皿，30—37℃培养8小时，观察菌落数，将每个培养皿菌落总数相加，每个棉签菌落数=（菌落数总和x总体积）/4。 m90.{$|%  ' F) g$ ^/ J' f
6.2.2.2涂抹部位 BOVC'FHQ  
7 T# X. U1 u9 I; ]* i- B1 n设备内外表面及墙壁（三个样）。涂抹结果记录于附表三。 :J>#N F  
) U2 f/ `: ]& S6 O4 E" j7.验证可接受标准： R40dGl[  
! E* A: q8 ]8 Y" N- d臭氧发生器开启60分种或90分钟时洁净室(区)内各洁净间臭氧浓度不小于10ppm。臭氧发生器开启60分钟或90分钟时洁净室（区）内微生物全部杀死。 )<}bZ33d  
, m  h, P: d3 Y) E[v`t*| `S  6 J' G8 k( I, M7 `& ~
8.验证进度安排： 
* a. D" Y4 G' C9验证结果评定： LQJKsB  6 u' X  ]& ?9 ?
验证小组负责根据验证情况，作出评定，写出验证报告。. {.

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验证可接受标准： R40dGl[  
5 |9 ^3 H; r3 t2 Z8 g) q7 Q$ {! _& B臭氧发生器开启60分种或90分钟时洁净室(区)内各洁净间臭氧浓度不小于10ppm。
! w% Y. B6 x- b. [1 d, S
3 ^0 e3 Q7 \2 i, S- n6 J/ S$ n验证方案中这个可接受标准不能是可选择的,这时你要验证的是你已经确定了的SOP能达到你预期的效果,所以这个时间应该是确定的,60分钟

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另建议做个预实验,臭氧消毒的效果往往不如人们想象,10的7次方的菌浓度的微生物真能杀灭否,值得考虑?

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撇开文件可行性不谈,就验证文件的格式和内容提点意见.
5 g1 Q$ }' L5 f: s% S( t8 c1、该验证程序过于简单，臭氧开启前的一些确认工作没有描述，这些很可能是实际操作中影响消毒效果的关键因素，如环境的状态，生产完成后清洁状态？另环境的条件，如温度，湿度等。
9 F8 x; G# x: M: }' C! [2、该验证属于消毒工艺的验证，应对工艺的变量和关键参数进行检查，评价并确认，如臭氧发生器的型号，臭氧产生能力，消毒空间的体积、消毒前环境的温度、湿度，消毒时间等等。

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这里还有个遗漏的，验证中挑战实验还需要采用你日常环境监测中的污染菌进行：）4 p* q' {3 o& ]3 y5 `
. m( R) n9 ~& O% L0 \* g- U
呵，占个今天第一贴：）

haiyue

楼上的建议不错，不过楼主的帖子能否编辑的好一点，这么多天书代码让人看的很不舒服．